Daño al ADN y sobreexpresión de p53 y hsp70 en leucocitos mononucleares humanos expuestos a rayos x

Abstract

Los rayos X empleados en medicina son una herramienta importante en el radiodiagnóstico, estas representan una fuente artificial significativa de exposición a la radiación ionizante para la población en general. Sin embargo, aunque las radiografías de diagnóstico brindan grandes beneficios, su uso implica un riesgo para desarrollar cáncer, generalmente aceptado por las dosis y el número de exposiciones que han sido consideradas no despreciadas principalmente para trabajadores de la salud. Se sabe que p53 es una molécula que dirige la corrección de daño al ADN y hsp70 es una proteína correctora de daño molecular cuando las células son sometidas a estrés. El objetivo del trabajo fue evaluar el daño al ADN así como la expresión de p53 y Hsp70 en leucocitos mononucleares humanos expuestos a Rayos X. El modelo biológico utilizado fue leucocitos mononucleares humanos de sangre periférica (LMHSP) y aislados por ensayo de exclusión de pacientes clínicamente sanos, la viabilidad celular y la cantidad celular inicial fueron evaluadas para cada dosis de exposición, se tomaron 14 alícuotas para el protocolo de exposición. Los leucocitos fueron expuestos a una fuente de rayos X provenientes de un equipo Marca Corix ®, de 70 KVp-8mA y tiempo de exposición de 0.15s para diferentes dosis absorbida de: 2.3, 4.6, 9.1 y 13.7 mGy por triplicado. La respuesta del daño al ADN se cuantificó mediante electroforesis con gel de agarosa, le expresión de la p53 y Hsp-70 se realizó mediante PAGE-SDS Western Blot., para la identificación de p53 y Hsp70 se utilizaron anticuerpos monoclonales específicos y se revelaron con DAB y H2O2, o bien con ECL. Los resultados para viabilidad celular inicial fueron del 100% y la cantidad celular fue de 88,333±4784 LMHSP. El comportamiento de viabilidad en el protocolo de irradiación se observó una diferencia significativa de disminución en comparación con el control negativo para las primeras tres exposiciones y en el comportamiento de la cantidad celular se observó un decremento significativo para las dos últimas exposiciones. Para el daño al ADN se observó un daño proporcional a la dosis de radiación recibida, aunque significativo solo para las dosis de 9.1 ,13.7 mGy y control positivo (muestra sometida a estrés calórico, 44°C/1hr). Además, se observó una expresión basal de p53 y Hsp70 en el control negativo, y una sobreexpresión en las dosis de 9.1 y 13.7 mGy para p53 y Hsp70, así como para el control positivo (44°C/1hr). Conclusión: los hallazgos permitieron estimar una respuesta de daño molecular y que se pueden utilizar las proteínas p53 y hsp70 como bioindicadores por exposición para usuarios de equipos de rayos X con esas características y asume una importancia significativa en protección radiológica.